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饲料中液态蛋氨酸轻基类似物的测定
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ICS 65
B 46
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中华人民共和国国家标准
GB/T 19371.2-2003
饲料中液态蛋氨酸轻基类似物的测定
高 效 液 相 色 谱 法
Determination of liquid methionine hydroxy analogue in feeds-
Hi gh p erf or m an ce l iq uid chromatography
2003-11一10发布2004-05-01实施
餐中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
发布
GB/T 19371.2- 2003
月U 舀
本标准由国家质量监督检验检疫总局提出。
本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。
本标准由国家饲料质量监督检验中心(北京)负责起草，诺伟思国际营养有限公司参加起草。
本标准主要起草人:闺惠文、赵小阳、王彤、杨文军、张秉范。
GB/T 19371.2-2003
饲料中液态蛋氨酸轻基类似物的测定
高 效 液 相 色 谱 法
范围
本 标 准 规定了高效液相色谱法(HPLC)测定配合饲料及浓缩饲料中液态蛋氨酸轻基类似物的
方法。
本标准最低检出量为1 Ago
2 规范性引用文件
下 列 文 件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有
的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究
是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准
GB /T 6 682 分析实验室用水规格和试验方法
G B/ T 14699.1 饲料采样方法
原理
用 10 % 的乙睛水溶液提取样品中的液态蛋氨酸经基类似物，用氢氧化钾将蛋氨酸轻基类似物水解
为有活性的单体，磷酸调节水解液的PH值。反相高效液相色谱分离，紫外检测器210 nm处测定。
4 试荆和溶液
以 下 所 用的试剂，除特别注明外均为优级纯试剂，水符合GB/T 6682一级用水的规定。
4.1 乙睛:色谱纯。
4.2 提取剂:10%乙睛水溶液
4.3 氢氧化钾溶液:500 g/L.
4.4 磷酸溶液:1十1(V+V).
4,5 HPLC流动相:0.05%三氟乙酸水溶液
4.6 液态蛋氨酸轻基类似物标准样品:除非购买标有准确含量的标样，否则需准确测定含量。
5 仪器设备
5. 1 振荡器:水平方向振荡，频率250 r/min-300 r/min,
5.2 溶剂过滤系统:全玻璃滤器，孔径。.2 [Cmo
5.3 HPLC系统，由下述部件组成:
— 泵 ，无脉冲。
— U V 检 测器，适合在210n m处测定。
— 保 护柱:填有C,a键合硅胶的预柱或性能相当的其他保护柱
— 分 析柱:填有粒度为5u m键合硅胶的C,。柱或性能相当的其他分析柱。
6 采样
6. 1 采样步骤:按GB/T 14699.1采集实验室样品
GB/T 19371.2- 2003
6.2 试样的制备:将实验室样品粉碎，全部通过。.45 mm筛，充分混匀，贮于磨口瓶中备用。
分析步骤
注 意 :液 态蛋氨酸轻基类似物PH较低，操作时应避免接触皮肤，如不慎接触皮肤，立即用水清洗。
7.1 参比样品的制备
为 了 检 验分析的准确性，每次分析(尤其是初次测定)均应进行参比样品的测定。
参 照 以 下步骤制备不同浓度的参比样品
注 :添 加用液态蛋氨酸轻基类似物要准确测定含量，混合样品可以用家庭用食品搅拌机，确保样品混合均匀。称量
样 品 时 ，准 确 至 小 数点后两位。
空 白 样 品是指确保没有加人液态蛋氨酸经基类似物的饲料样品。
7.1.1 5.0%参比样品的制备:准确称取282.9 5g 空白样品，准确加人17.0 5g 液态蛋氨酸经基类似物
(88.00 )标准样品，混合均匀。
7.1 .2 0.4%参比样品的制备:准确称取138.0 0g 空白样品，准确加人12.0 0g 5.0 %参比样品，混合
均匀
7.1.3 0.2%参比样品的制备:准确称取144.0 0g 空白样品，准确加人6.0 0g 5.0 %参比样品，混合
均匀。
根 据 需 要配制不同浓度的参比样品。
参 比 样 品配制后室温下平衡三天后使用，6个月内有效。
7.2 提取
称 取 试 样2g -5g (精确至。.0 00 1g )，置于150m l一具塞三角瓶中，准确加人一定量的提取液(一
般50 mL-100 mL),混合后置于振荡器上剧烈振荡30 min,静置10 min，离心或过滤，滤液备用。
7.3 水解
准 确 移 取滤液(7.2)5m l于10m L具塞试管中，准确加人0.1 m l氢氧化钾溶液(4.3 )，手摇至少
10s ，准确加人0.2 m L磷酸溶液(4.4)，手摇至少10s ，水解液离心或过滤，滤液过。.2 p m滤膜后备用。
7.4 标准溶液的制备
准 确 称 取1.1 360 g 液态蛋氨酸经基类似物(88.00%)标准样品，用提取剂(4.2 )定容至10 00m L,
该溶液的浓度为1. 00 mg/mL.
准 确 吸 取2.5 m 工5.0 m L,10.0 m L,20.0 m L以上溶液至50mL容量瓶，用提取剂(4.2)定容至刻
度后摇匀，此标准系列的浓度为0.05m g/mL,O.10 m g/mL,O.20 m g/mL,0.40m g/mL,1.00mg/mL,
用 以 上 标准系列与试样提取液同时做水解，测定。
7. 5 HPLC测定
7.5.1 色谱条件
a) 流 速:1.0m l-/min.
b) 检 测波长:210n m
c) 进 样 量:20V L
7.5.2 测定
向 H PL C分析仪连续注人液态蛋氨酸经基类似物标准溶液，直至得到基线平稳，峰形对称且峰面
积能够重现的色谱峰。
依 次 注 人标准、参比样品及试样水解液，积分得到峰面积，用标准系列进行单点或多点校准。
结果计算
试样中液态蛋氨酸经基类似物的含量X以质量分数表示，按式(1)计算:
‘ XV
m X 1 000
又100 (1)
GB/T 19371.2-2003
式中:
c— 由标准曲线查得的试样测定液中液态蛋氮酸经基类似物的浓度，单位为毫克每毫升
(m g/ m L) ;
V— 加到试样中的提取液体积，单位为毫升(ML) ;
m— 试样质量，单位为克(9)
结果表示至小数点后两位。
9 允许差
当 含量 小 于0.5 %时，两个平行试料测定值相差不大于。0500;当含量大于或等于。.5%时，两个
平行试料测定值的相对偏差不大于5%,
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